建立了一种新的小麦脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)高效液相色谱检测方法。采用聚乙二醇和水对小麦样品进行振荡提取，提取液分别用活性炭、柱层析硅胶、中性氧化铝、酸性氧化铝、碱性氧化铝净化，比较几种吸附剂对小麦DON净化效果。结果表明，用酸性氧化铝净化效果最好，除杂率为66.3%，净化液通过0.22 μm聚醚砜滤膜可直接用于HPLC检测；色谱条件：分离柱为C18柱；流动相为甲醇∶水（20∶80）；波长为230 nm。三水平加标平均回收率为91.0%～103.7%，不同污染水平的小麦阳性样品精密度试验相对标准偏差（RSD）为2.3%～8.5%；与免疫亲和柱（IAC）净化方法比较，方法间误差为2.3%～8.4%。本方法具有操作简便、快速、准确、成本低，可满足小麦DON大宗样品定量测定的要求。