常压低温等离子体对鲜切胡萝卜表面金黄色葡萄球菌的杀菌效果及品质影响

张志伟

(青岛农业大学 食品科学与工程学院;青岛市现代农业质量与安全工程重点实验室,山东 青岛 266000)

为了解决鲜切胡萝卜微生物安全问题,采用常压低温等离子体(APLTP)对鲜切胡萝卜表面进行杀菌处理,研究ATLTP对鲜切胡萝卜表面金黄色葡萄球菌的杀菌效果。在单因素实验的基础上,利用响应面分析方法建立金黄色葡萄球菌杀菌率的二次项数学模型,利用模型对处理电压、处理时间和处理极距及其相互作用进行分析。结果表明:ATLTP能有效杀死鲜切胡萝卜表面的金黄色葡萄球菌,各因子对杀菌率的影响大小依次是处理电压>处理极距>处理时间,最佳工艺条件为处理电压170 V,处理时间5 min,处理极距2.5 cm,此时杀菌率高达92.35%,与预测值92.26%接近,提高了鲜切胡萝卜食用安全性。APLTP处理前后胡萝卜的水分含量、可溶性固形物、pH值、色泽、相对电导率、丙二醛及Vc含量变化均不显著(P>0.05),较好的保持了胡萝卜的水分、糖度、酸度和颜色,同时维持了细胞膜的通透性及抗氧化能力。

关键词鲜切胡萝卜;常压低温等离子体(ATLTP);金黄色葡萄球菌;杀菌率

鲜切果蔬(Fresh-cuts fruits and vegetables),又叫半处理果蔬和轻(微)度加工果蔬(Minimally processed fruits and vegetables),只改变水果和蔬菜的物理形状,但仍然保留其新鲜状态的可食用果蔬产品[1]。鲜切产品作为一种新兴食品工业化产品,最早源于美国20 世纪50 年代,刚开始主要是供应餐饮业,随后又进入零售业,60 年代开始商业化生产。到了80 年代后,欧洲和日本等国家的鲜切产业也得到了迅猛的发展[2]。我国的鲜切果蔬市场尚处于起步阶段[3]。由于鲜切果蔬具有新鲜、自然、便利、环保、健康、即食等特点和现代生活节拍的加快,鲜切果蔬产品愈来愈受到政府的关注和消费者的青睐[4]。目前工业化生产鲜切果蔬的品种主要有抱子甘蓝、胡萝卜、莴苣(生菜)、芹菜、圆葱、马铃薯、菠萝片、苹果片、瓜类等[5]

但鲜切果蔬产品在加工、贮藏和流通过程中特有的生物学、物理化学和微生物学等变化因素,使其保鲜难度大大增加。鲜切产品中有多种微生物,研究已发现的微生物有嗜中温细菌、乳酸菌、金黄色葡萄球菌、酵母菌、霉菌等[6]。作为革兰氏阳性菌的代表,金黄色葡萄球菌是引起细菌感染的最常见的细菌之一,美国疾病控制中心报告,由金黄色葡萄球菌引起的感染占第二位,仅次于大肠杆菌,可引起局部化脓感染,也可引起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等,甚至败血症、脓毒症等全身感染。目前应用的保鲜方法主要有气调贮藏、低温冷藏、冷杀菌处理、保鲜剂处理以及涂膜处理等[7-10]。等离子体杀菌作为一种新兴的绿色灭菌技术,能高效产生杀死或失活微生物的自由基及活性成分,有效地消灭细菌,具有温度低、耗时短、效率高、无污染、无毒素等优点,等离子体杀菌能以最大程度维持食品的色、香、味、形,在食品应用领域得到广泛普及[11-14]。随着研究的不断深入,等离子体技术在实验上取得了许多进展,但常压低温等离子体(Atmospheric pressure low-temperature plasma,ATLTP)设备对鲜切果蔬微生物的研究较少[15-18]

本实验以鲜切胡萝卜为原料,研究ATLTP在不同的处理电压、处理极距、处理时间下对金黄色葡萄球菌的影响,在单因素实验基础上,利用响应面优化ATLTP杀菌条件,为降低鲜切胡萝卜表面致病菌含量,延长其货架期及提高其食用安全性提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

胡萝卜:购自青岛市城阳大润发超市;0.1%无菌蛋白胨水溶液、LB肉汤、LB营养琼脂:青岛海博生物技术有限公司;金黄色葡萄球菌:青岛农业大学中韩食品生物技术室保存菌种;钼酸铵:天津市风船化学试剂科技有限公司;硫代巴比妥酸:上海山浦化工有限公司。

1.2 仪器与设备

洁净工作台:苏净集团安泰公司;电热恒温培养箱:龙口市先科仪器公司;AR224CN电子天平:奥豪斯仪器有限公司;BS-1500L电子天平:启东友铭衡器有限公司;远红外干燥箱:江苏东台电器厂;BKQP-50L高压蒸汽灭菌锅:济南博鑫生物技术有限公司;Bagmixer-400W型均质器:法国Interscience公司;PAL-福折射仪:广州爱宕科学仪器有限公司;pHS-3C型pH计:杭州齐威有限公司;CR-400色差仪:日本柯尼卡美能达公司;TU-1810紫外分光光度计:北京普析通用仪器有限责任公司;FE38电导率仪:上海Mettler-toledo仪器有限公司。

1.3 常压等离子体设备实验装置

常压等离子体设备实验装置由中国科学院等离子体物理研究所研制,构成如图1所示。

1 氩气瓶;2超净工作台;3 样品;4 等离子体电极;5 TDGC2-2型接触调压器;6 LZB-10浮子流量计;7 高度调节器;8 等离子体;9 高频电压交流电源
图1 常压等离子体设备实验装置图

1.4 实验方法

1.4.1 微生物检测

1.4.1.1 菌悬液制备

用无菌接种环取适量斜面培养的金黄色葡萄球菌于灭菌的LB肉汤中,放在37 ℃摇床中过夜培养,制备浓度约为8 log CFU/mL菌悬液。

1.4.1.2 样品制备及处理

在常温无菌操作室内,将新鲜胡萝卜用无菌水冲洗干净后,用消毒的无菌刀将胡萝卜切成片状,每25 g鲜切样品接种1 mL金黄色葡萄球菌菌液,在无菌操作室中的生物安全柜中干燥30 min,之后进行ATLTP处理。

1.4.1.3 金黄色葡萄球菌计数

将处理好的样品装入无菌袋中,倒入225 mL无菌蛋白胨水(0.1%),置于均质器中,设置速度为6 mL/s,时间为1 min,制备1∶10的稀释液,然后取袋内溶液1 mL,稀释成不同梯度的浓度。选取合适梯度的稀释液1 mL于平板中心,倾注灭菌冷却的LB营养琼脂摇晃使其混合均匀。待琼脂凝固之后,于37 ℃培养18~24 h后计数。每个梯度重复3次。

1.4.1.4 单因素实验设计

选取处理电压分别为150、155、160、165、170 V,处理时间3 min,处理极距3 cm,研究ATLTP处理电压对金黄色葡萄球菌杀菌率的影响。选取处理时间为1、2、3、4、5 min,处理电压170 V,处理极距3 cm,研究ATLTP处理时间对金黄色葡萄球菌杀菌率的影响。选取处理极距为2、2.5、3、3.5、4 cm,处理电压170 V,处理时间3 min,研究ATLTP处理极距对金黄色葡萄球菌杀菌率的影响。

1.4.1.5 响应面法优化ATLTP对杀菌效果的影响

在单因素实验基础上,利用Box-Behnken实验设计以处理电压、处理时间、处理极距为考察变量,分别以ABC表示,以杀菌率Y为响应值,以-1、0、+1分别代表自变量的低、中、高水平进行编码,实验因子及水平见表1。

1响应面法实验设计的因子和水平

因子水平-1 0 1处理电压A/V160165170处理时间B/min345处理极距C/cm22.53

1.4.1.6 微生物计数

采用金黄色葡萄球菌杀菌率分析各因素对ATLTP杀菌效果的研究,杀菌率公式(1)。

(1)

式中:N0为ATLTP处理前金黄色葡萄球菌菌落数;N为ATLTP处理后金黄色葡萄球菌菌落数;R为杀菌率。

1.4.2 理化指标测定

水分含量:参照GB 5009.3—2016食品安全国家标准食品中水分的测定;可溶性固形物(TSS):用数显折光仪测定;pH:采用pH计测定;丙二醛含量:采用硫代巴比妥酸比色法进行测定;抗坏血酸(Vc):采用钼蓝比色法[19]测定;果肉色泽:使用CR-400色差仪测定,测定参数为L*值、a*值、b*值。所有测定均重复3次。

相对电导率的测定:将胡萝卜切成大小一致厚薄均匀的薄片,准确称取2 g于50 mL的蒸馏水中浸泡2 h,用电导率仪测定其电导率,记录数据。再经加热煮沸处理20 min,待冷却后测定电导率。每个样品重复3次。相对电导率按公式(2)计算。

(2)

式中,R为相对电导率,%;R1为煮沸前电导值,μs/m;R2为煮沸后电导值,μs/m。

1.4.3 数据处理与分析

采用Microcal Origin7.5软件制图并对数据进行方差分析(ANOVA),显著性水平为0.05,当P<0.05时表示差异显著。

2 结果与分析

2.1 APLTP对杀菌效果的影响

2.1.1 处理电压、处理时间及处理极距对鲜切胡萝卜表面金黄色葡萄球菌的影响

由图2可以看出,ATLTP对鲜切胡萝卜表面的金黄色葡萄球菌具有明显致死作用,在处理时间3 min、处理极距3 cm的条件下,随着电压的升高,ATLTP对金黄色葡萄球菌的杀菌效果逐渐增强,160 V以上时杀菌效果趋于平稳,在170 V时鲜切胡萝卜表面的金黄色葡萄球菌致死79.01%。与Kim等[20]研究等离子体对辣椒表面的杀菌作用结果一致,等离子体电压对杀菌效率有显著影响,电压增高,杀菌率增大。

图2 处理电压对鲜切胡萝卜表面金黄色葡萄球菌的影响

图3显示,在处理电压170 V、处理极距3 cm的条件下,ATLTP处理时间对鲜切胡萝卜表面金黄色葡萄球菌的影响。ATLTP对金黄色葡萄球菌杀菌效果随着处理时间的延长而增加,当处理时间达到3 min后杀菌率逐渐趋于平缓,在5 min时鲜切胡萝卜表面金黄色葡萄球菌的杀菌率达到86.88%。Misra等[21]的研究表明杀菌率随时间延长先上升后平缓,与本研究结果一致。

图3 处理时间对鲜切胡萝卜表面金黄色葡萄球菌的影响

图4显示在处理电压170 V、处理时间3 min的条件下,ATLTP处理极距与鲜切胡萝卜表面金黄色葡萄球菌的致死率成反比,2 cm时杀菌率可达84.89%。

图4 处理极距对鲜切胡萝卜表面金黄色葡萄球菌的影响

2.1.2 实验模型的建立及显著性检验

为进一步优化ATLTP处理条件,根据BOX-Benhnken实验设计原理,选取处理电压(A)、处理时间(B)和处理极(C)3个对鲜切胡萝卜表面金黄色葡萄球菌杀菌率影响显着的因素,采用3因素3水平的响应面分析方法进行实验设计。表2列出了实验设计及其结果,以3次实验所得杀菌率的平均值为响应值(Y),表3列出了响应面方差分析结果。

2.1.3 ATLTP对鲜切胡萝卜表面金黄色葡萄球菌杀菌率的响应面分析

由表2实验结果经Design-Expert软件对数据进行回归分析拟合,得到处理电压(A)、处理时间(B)、处理极距(C)之间的二次多项回归方程见公式(3):

Y=85.57+3.49A+2.08B-2.39C+3.36AC-0.73BC-3.11A2+0.71B2-2.65C2

(3)

2响应面实验设计及其结果

实验号A:处理电压/VB:处理时间/minC:处理极距/cmY:杀菌率/%1-1-1081.05 21-1080.71 3-11078.90 411091.99 5-10-179.61 610-183.61 7-10172.41 810183.58 90-1-183.99 1001-189.22 110-1179.50 1201181.80 1300085.21 1400086.59 1500084.92 1600085.68 1700085.43

由表3可知,回归模型显著,失拟项不显著,R2=0.983 0>0.96,说明该方程拟合得较好,能有效表现出ATLTP杀菌效果与处理电压、处理时间、处理极距间的关系。表3显示一次项ABC、交互项ABAC、二次项A2C2是极显著的,因此处理电压、处理时间及处理极距对杀菌率的影响不是一般线性关系。各因素对杀菌率的影响由强到弱依次是A>C>B,即处理电压>处理极距>处理时间。

3响应面方差分析结果

方差来源平方和自由度均方F值P值显著性模型312.91934.7744.95<0.000 1∗∗∗A97.44197.44125.99< 0.000 1∗∗∗B34.69134.6944.860.000 3∗∗∗C45.79145.7959.210.000 1∗∗∗AB45.09145.0958.300.000 1∗∗∗AC12.85112.8516.620.004 7∗∗∗BC2.1512.152.770.139 7∗A240.84140.8452.800.000 2∗∗∗B22.1312.132.750.141 2∗C229.55129.5538.210.000 5∗∗∗残差5.4170.77失拟项3.7931.263.110.1508∗纯误差1.6240.41总差318.3316R20.983 0

注:*为差异不显著(P>0.05);**为差异显著(P<0.05);***为差异极显著(P<0.01)。

图5为处理极距为2.5 cm时,处理电压和处理时间对鲜切胡萝卜表面金黄色葡萄球菌杀菌效果的交互作用。响应面显示坡度较陡,表明处理电压和处理时间的交互作用显著。等高线图反映,处理时间一定时,杀菌效果随着处理电压的增大逐渐增强;处理电压一定时,杀菌效果随着处理时间的增加逐渐增强。图6显示处理时间为4 min中时,处理电压和处理极距对杀菌效果的交互作用,等高线图反映处理电压一定时,处理极距与杀菌率成反比。图7显示处理电压为165 V时,处理时间和处理极距对杀菌效果的作用,响应面比较平缓反应处理时间和处理极距的交互作用不明显。等高线图反映处理极距一定时,杀菌率随着处理时间的增大而增大;处理时间一定时,杀菌率随着处理极距的增大而减小。

图5 处理电压与处理时间交互影响杀菌效果的响应面图和等高线图

图6 处理电压与处理极距交互影响杀菌效果的响应面图和等高线图

图7 处理时间与处理极距交互影响杀菌效果的响应面图和等高线图

由二次多项式的回归方程经数学分析,得到杀菌率的最大值。确定最优实验条件为处理电压170 V,处理时间5 min,处理极距2.37 cm,此时杀菌率可达92.26%。根据ATLTP的设备要求以及杀菌效果,将最佳杀菌条件调整为处理电压170 V,处理时间5 min,处理极距2.5 cm。为验证实验结果,重复3次最优条件取平均值,鲜切胡萝卜表面金黄色葡萄球菌杀菌率为92.35%,与预测值仅相差0.09%,处理前后菌落变化比较图见图8。

图8 处理前后菌落比较图

2.2 APLTP处理对鲜切胡萝卜品质的影响

鲜切胡萝卜的的品质指标主要包括水分含量、可溶性固形物、pH、颜色、滋味、外形等。APLTP处理前后对鲜切胡萝卜感官品质变化如表4所示,经170 V、5 min、2.5 cm常压等离子体处理后鲜切胡萝卜水分含量、可溶性固形物、pH 值及色泽参数(L*、a*、b*)变化均不显著(P>0.05),说明APLTP处理后鲜切胡萝卜的水分和颜色、糖度、酸度得到了较好的保持。

相对电导率是反映果蔬细胞膜透性的重要指标之一,相对电导率越高,说明细胞膜透性越大,细胞受损程度也就越严重[22]。丙二醛(MDA)是膜脂过氧化分解的产物,通常将丙二醛作为膜脂过氧化的重要指标[23],用来表示细胞膜脂过氧化程度和逆境伤害的强弱。如表4所示,相对电导率及MDA含量都有少量增加,但变化并不明显(P>0.05),说明APLTP对细胞膜有一定的影响,但影响可以忽略不计。Vc是胡萝卜重要的品质指标,经过APLTP处理的胡萝卜Vc含量变化不明显(P>0.05),说明APLTP能够较好的保持了胡萝卜的Vc含量。

4 APLTP处理对鲜切胡萝卜品质的影响

指标处理前处理后 水分含量/%95.926±0.07a 95.920±0.07a Vc/(mg/100g)27.23±0.12a27.54±0.25a 相对电导率/%11.75±0.09a11.92±0.18a 丙二醛/(μmol/L)0.001 75±0.000 50a0.001 89±0.000 82a 可溶性固形物/(°Brix)6.88±0.08a6.69±0.12a pH6.71±0.08a6.69±0.12a L∗53.26±0.18a52.76±0.24a a∗11.26±0.15a11.12±0.11a b∗13.17±0.009a13.21±0.13a

注:同列上标小写字母相同,表示差异不显著(P>0.05)。

3 结论

本实验研究了ATLTP处理鲜切胡萝卜表面金黄色葡萄球菌的杀菌效果,比较不同的处理电压、处理时间、处理极距对杀菌率的影响。结果表明:ATLTP对鲜切胡萝卜表面金黄色葡萄球菌具有显着的杀菌效果,固定处理时间和处理极距时,杀菌率随着处理电压的升高而增加;固定处理电压和处理极距时,杀菌率随着处理时间的延长而增加;固定处理电压和处理时间时,杀菌率与处理极距成反比,杀菌率随着处理极距的增高而降低。

在单因素实验基础上,利用响应面法建立了ATLTP对鲜切胡萝卜表面金黄色葡萄球菌杀菌效果的二次多项数学模型,当处理电压为170 V、处理时间为5 min、处理极距为2.5 cm时金黄色葡萄球菌杀菌率可达92.35%,与预测值92.26%接近,说明该模型可用于实际预测。

在响应面法的基础上得到最佳工艺条件,用最佳条件170 V、5 min、2.5 cm的APLTP处理胡萝卜,测定处理前后胡萝卜的水分含量、可溶性固形物、pH 值、色泽、相对电导率、丙二醛及Vc含量变化。结果表明各指标变化均不显著(P>0.05),说明APLTP能够较好保持胡萝卜的水分、糖度、酸度和颜色,APLTP并没有对细胞膜造成损害,维持了细胞膜的通透性及脂质氧化程度,同时Vc含量也得到了较好保持。

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Effect of atmospheric Pressure low-temperature plasma on sterilization rate of staphylococcus aureus on sliced carrot surface and quality attributes

ZHANG Zhi-wei
(College of Food Science and Engineering, Qingdao Agricultural University;Qingdao Key Laboratory of Modern Agricultural Quality and Safety Engineering, Qingdao Shandong 266000)

AbstractIn order to solve the problem of microbial safety on the cut surface of fresh carrot, the surface was sterilized by atmospheric pressure low-temperature plasma(ATLTP) to study sterilization effect on staphylococcus aureus. On the basis of single factor test, a quadratic polynomial mathematical model for the sterilization rate of staphylococcus aureus was established by response surface methodology to analyze the effects of processing voltage, processing time and processing pole distance, and their pairwise interactions. The experimental results showed that staphylococcus aureus on the fresh cut carrot surface could be effectively killed by ATLTP. Factors influencing the sterilization rate were in order as processing voltage>processing pole distance>processing time. The conditions were optimized as follows: processing voltage 170 V, processing time 5 min, processing pole distance 2.5 cm. The sterilization rate reached to 92.35% under these conditions, which closed to the predicted value of 92.26%, and improves the edible safety of fresh sliced carrot. The water content, soluble solids, pH value, color, relative conductivity, malondialdehyde and Vc content of carrot were not significantly changed (P>0.05) . It is better to maintain the moisture, sugar, acidity and color of carrot, while maintaining the cell membrane permeability and antioxidant capacity.

Key words:sliced carrot; atmospheric pressure low-temperature plasma; staphylococcus aureus; sterilization rate capacity.

中图分类号TS 201.3

文献标识码:A

文章编号:1007-7561(2018)03-0050-06

收稿日期2017-10-19

基金项目国家自然基金项目(31271963);山东省农业产业技术体系蔬菜创新团队(SDAIT-5-21);青岛农业大学高层次人才启动基金(66311115045)

作者简介张志伟,1979年出生,男,讲师,博士.