植物油中生育酚与生育三烯酚测定方法比较

（马来西亚棕榈油总署大马棕榈油技术研发（上海）有限公司，上海 201108）

摘要：比较AOCS中两种测定生育酚与生育三烯酚的方法，即高效液相色谱-紫外法和高效液相色谱-荧光法。结果表明：高效液相色谱-荧光法具有更好的回收率和准确性、更低的检出限和良好的抗杂质干扰能力，使用高效液相色谱-荧光法测定12种植物油中生育酚与生育三烯酚的含量，其结果均在文献参考范围之内。

生育酚（T）和生育三烯酚（T3）统称维生素E，根据其苯环上所含甲基位置和数目的不同，可分为α-生育酚（α-T）、β-生育酚（β-T）、γ-生育酚（γ-T）、δ-生育酚（δ-T）和α-生育三烯酚（α-T3）、β-生育三烯酚（β-T3）、γ-生育三烯酚（γ-T3）、δ-生育三烯酚（δ-T3），分子结构式见图1。

油脂中生育酚与生育三烯酚的分析方法主要包括高效液相色谱法、气相色谱法、薄层色谱法、比色法［1-2］，其中高效液相色谱法是国标中常用的方法，如农业标准NY/T 1598［3］为高效液相色谱-紫外的方法测定植物油中维生素E含量，国标GB/T 26635［4］为高效液相色谱荧光法测定油脂中生育酚与生育三烯酚的含量，AOCS Ce 8-89［5］包含了高效液相色谱紫外法和高效液相色谱荧光法。为探索高效液相色谱紫外法与高效液相色谱荧光法测试油脂中生育酚与生育三烯酚含量的差别，本文选用了AOCS中的两种检测方法进行比较，通过比较高效液相色谱紫外法（HPLC-UV）与高效液相色谱荧光法（HPLC-FLD）的检出限、抗杂质干扰能力和回收率，得出最优方法，并用该方法测定了12种植物油中生育酚与生育三烯酚的含量，对比测试值与文献值的差别。

1 材料与方法

红棕油：马来西亚Sime Darby Plantation；24度棕榈油、18度棕榈油：天津聚龙嘉华投资集团有限公司提供；其他油脂均购于市场。

β-T标准品、γ-T标准品、δ-T标准品：美国supelco analytical公司；混标（α-T、α-T3、β-T3、 γ-T3、δ-T3）：马来西亚Sime Darby Plantation公司；正己烷（色谱纯）：美国Honeywell公司；异丙醇（色谱纯）：上海展云化工有限公司。

Agilent 1200高效液相色谱仪，配Agilent G1314B紫外检测器和Agilent G1321A荧光检测器：美国Agilent公司；KQ2200E超声波清洗器：昆山市超声仪器有限公司；针筒式微孔滤膜过滤器（Φ 13 mm，孔径0.45 μm）：常州悦康医疗器材有限公司；电子天平（精度0.1 mg）：瑞士Mettler Toledo公司；移液枪：德国Brand公司。

色谱柱为LiChroCART Si60（250 mm×4 mm，5 μm），配有紫外和荧光检测器，紫外检测波长为292 nm，荧光激发波长290 nm、发射波长330 nm；柱温为30℃；流动相为正己烷与异丙醇（体积比为99.5∶0.5）；流速为0.8 mL/min；进样量为25 μL。外标法定量。

精确称量γ-T标准品4 mg、δ-T标准品4 mg、混标30 mg，移液枪移取100 μL β-T标准品用正己烷溶解稀释后，分别定容至10 mL棕色容量瓶中，置于冰箱冷藏备用，分别取上述标准品溶液1 mL定容至10、25、50、100、250 mL。以生育酚和生育三烯酚的浓度（μg/mL）为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，并计算其回归方程。

准确称取1 g植物油于10 mL试管中，加入5 mL正己烷为分散剂，超声波提取10 min，转移至10 mL容量瓶中，用正己烷定容至刻度，过0.45 μm的滤膜后进高效液相色谱仪分析，根据含量-峰面积标准曲线进行定量分析。

2 结果与分析

配制不同浓度的生育酚与生育三烯酚标准溶液经HPLC-UV和HPLC-FLD分析，混合标准溶液的HPLC-UV色谱图见图2，HPLC-FLD色谱图见图3以峰面积y对质量浓度x作图，用Excel软件进行回归拟合，得到标准曲线的线性回归方程见表1和表2。

图2　混合标准溶液高效液相紫外色谱图

注：1，α - T；2，α - T3；3，β - T；4，β - T3+ γ - T；5，γ - T3；6，δ - T；7，δ -T3。

图3　混合标准溶液高效液相荧光色谱图

注：1，α - T；2，α - T3；3，β - T；4，β - T3+ γ - T；5，γ - T3；6，δ - T；7，δ - T3。

表1　HPLC-UV法检测生育酚与生育三烯酚的线性方程、相关系数和检出限

表2　HPLC-FLD法检测生育酚与生育三烯酚的线性方程、相关系数和检出限

检出限是反映样品中检出待测物质的最小浓度或最小量，是衡量方法灵敏度的重要指标，对比HPLC-FLD法与HPLC-UV法的检出限可以看出，HPLC-FLD法具有更低的检出限，因此HPLC -FLD法具有更好的灵敏度，适用于低浓度生育酚与生育三烯酚的检测。

为考察方法的准确性，分别用HPLC-UV法和HPLC-FLD法测定茶油、玉米油、红棕油中的生育酚与生育三烯酚，对比观察色谱图杂质峰的多少与大小，并做加标回收率比较，同一水平下测试5次，计算变异系数。

茶油、玉米油和红棕油的HPLC-UV色谱图与HPLC-FLD色谱图见图4～图9，回收率和变异系数分别见表3和表4。

对比HPLC-UV与HPLC-FLD色谱图发现：紫外检测器受杂质影响较大，会出现较多的杂峰，而荧光检测器受杂质影响较小，不会出现较乱的杂峰。

加标回收率是常用的确定方法准确度的质控手段之一，通过表3和表4比较HPLC-UV法与HPLC-FLD法的加标回收率，可以看出HPLCFLD法的回收率范围在77.1%～109.6%，而HPLCUV法的回收率范围较大，其中茶油中α-T的回收率达到170.6%，玉米油中γ-T+β-T3的回收率只有24.6%；红棕油中γ-T3的回收率只有37.9%。经5次重复性测试，计算变异系数RSD，其结果均小于6.0%，表明两种测试方法重现性较好。因此通过回收率比较可以得出：使用HPLC-UV法测定生育酚与生育三烯酚时，测试值与实际含量相差较大，而HPLC-FLD法的回收率在合理范围之内，可以精确地测定植物油中的生育酚和生育三烯酚含量。

表3　HPLC-UV法测定茶油、玉米油、红棕油中生育酚_____与生育三烯酚的回收率和变异系数（RSD）　%

表4　HPLC-FLD法测定茶油、玉米油、红棕油中生育酚_____与生育三烯酚的回收率和变异系数（RSD）　%

根据上述实验结果，采用HPLC-FLD法测定12种植物油中生育酚与生育三烯酚的含量，测试结果见表5。

表5　12种植物油中生育酚与生育三烯酚的含量　mg/k

-注：nd指未检出。

不同油种中生育酚与生育三烯酚的含量与排序如表5所示，红棕油中生育酚与生育三烯酚总含量最高，为771.04 mg/kg，同时生育三烯酚的含量也最高，为587.83 mg/kg，其次是24度棕榈油和18度棕榈油，茶油中生育酚与生育三烯酚的含量最低，仅为100.08 mg/kg，测试结果均在参考文献值［6-17］范围之内。

3 结论

通过比较高效液相色谱-荧光法与高效液相色谱紫外法测定生育酚与生育三烯酚，发现高效液相色谱-荧光法具有更好的回收率和准确性，更低的检出限和良好的抗杂质干扰能力。采用高效液相色谱-荧光法测定12种植物油中生育酚与生育三烯酚的含量，其结果在文献值参考范围之内。

［1］王胜南，代志凯，赵健，等.棕榈油脱臭馏出物中生育酚及生育三烯酚的测定［J］.中国食品添加剂，2014（4）：144-149.

［2］楼建华，吴彩娟，杨亦文，等.棕榈油中生育酚和生育三烯酚的HPLC测定［J］.食品工业科技，2006，27（7）：176-179.

［3］NY/T 1598-2008.食用植物油中维生素E组分和含量的测定高效液相色谱法［S］.

［4］GB/T 26635-2011.动植物油脂生育酚及生育三烯酚含量测定高效液相色谱法［S］.

［5］AOCS Ce 8-89.Determination of Tocopherols and Tocotrienols i Vegetable Oils and Fats by HPLC［S］.

［6］彭光华，王辉，张春雨，等.高效液相色谱法测定菜籽油中维生素E含量［J］.中国粮油学报，2008，23（4）：211-214.

［7］章海风，周晓燕，李辉，等.3种食用油在油条煎炸过程中的品质变化比较［J］.食品科学，2013，34（22）：160-164.

［8］王瑞英，汤静，张丽静，等.高效液相色谱法测定各植物油中维生素E含量［J］.新疆大学学报，2003，20（4）：393-395.

［9］李桂华，郭良玉，付黎敏.高效液相色谱法测定精炼程度不同的植物油中各种生育酚的含量［J］.郑州粮食学院学报，1994，1（2）：34-39.

［10］李柰，樊琛，李小波，等.食用植物油中生育酚含量测定方法优化及分析［J］.食品科学技术学报，2015，33（3）：59-63.

［11］聂明，杨水平，姚小华，等.不同加工方式对油茶籽油理化性质及营养成分的影响［J］.林业科学研究，2010，23（2）：165-167.

［12］王洁，张宁，王淑静，等.高效液相色谱法测定宁夏11种食用植物油中的维生素E［J］.宁夏医学院学报，2000，22（1）：11-12.

［13］杨金娥，黄庆德，郑畅，等.烤籽温度对压榨亚麻籽油品质的影响［J］.中国油脂，2011，36（6）：28-31.

［14］吴晓磊，潘勤.南瓜籽油的化学成分与药理作用［J］.现代药物与临床，2009，24（6）：336-338.

［15］李星，娄丽娟，刘会娟，等.南瓜籽油的营养功能与制取方法［J］.农业机械，2013（3）：42-44.

［16］杨波涛，陈凤香，莫文莲，等.我国食用植物油维生素E含量研究［J］.粮油加工，2009（9）：52-55.

［17］杨青坪，梁少华，杨瑞楠.不同熔点棕榈油组成的研究［J］.河南工业大学学报（自然科学版），2015，36（1）：27-31.

Comparison of determination methods of tocopherols and tocotrienols in vegetable oils

PAN Kai-lin，JI Min，NIU Yue-ting，HU Ming-ming，OOI Cheng Keat
（Palm Oil Research and Technical Service Institute，Malaysian Palm Oil Board，Shanghai 201108）

Abstract：Two methods in AOCS were compared to determine tocopherols and tocotrienols in ve（getable oils.The results showed that the high performance liquid chromatography-fluorescence detectionHPLC -FLD）was more sensitive than high perfo，rmance liquid chromatography-ultraviolet（HPLC-UV），which has better recovery rate and accuracylower detection limits and higher resistance to interference of impurity.The results of determining tocopherols and tocotrienols in 12 kinds of vegetable oils by HPLCFLD were all in the reference range of the literatures.